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1. 首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。

2. 用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量叢瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)趨置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4. 靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài);建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

5. 貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代;若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5m左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。

6. 懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離 心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5m培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密，度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

溫馨提醒:
可將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中備用;細(xì)胞*傳代時(shí)，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時(shí)將部分細(xì)胞凍存，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，避免后期實(shí)驗(yàn)失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

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